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Descripción
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| Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Psv) es la bacteria causante de la tuberculosis del olivo. La reciente secuenciación del genoma de la cepa Psv NCPPB 3335 ha permitido el abordaje de estrategias de alto rendimiento para la identificación de genes que codifican efectores putativos del sistema de secreción tipo III (T3SS). En primer lugar, se llevó a cabo una búsqueda de secuencias relacionadas con efectores T3SS en el genoma de Psv utilizando tres aproximaciones bioinformáticas: i) homología de secuencia con efectores previamente descritos, ii) presencia de péptido señal de translocación y, iii) presencia de promotores inducibles por el regulador HrpL (caja hrp). Este análisis reveló la existencia de 30 genes candidatos, de entre los cuales, 19 mostraron una identidad elevada con efectores previamente descritos en otras bacterias fitopatógenas. Otros 11 genes, en los cuales se identificó tanto la caja hrp como la secuencia codificadora del péptido señal, no mostraron identidad con la secuencia de ningún gen con función conocida hasta la fecha. Con el fin de determinar si los genes identificados bioinformáticamente codifican proteínas translocadas a través del T3SS de Psv, se han llevado a cabo fusiones traduccionales de algunos de ellos al codificador de la adenilato ciclasa (cyaA), utilizando para ello la tecnología Gateway. Este ensayo, se basa en la cuantificación del AMPc producido como consecuencia de la actividad catalítica del domino Cya, el cual activa de forma exclusiva e irreversible la calmodulina eucariota. Tras seleccionar transformantes de las fusiones construidas en la cepa silvestre Psv NCPPB 3335 y en un mutante nulo de secreción afectado en el gen hrpA (NCPPB 3335¿hrpA), los ensayos de translocación se están llevado a cabo en plantas de Nicotiana benthamiana var. Newdel, huésped en el cual Psv induce una reacción incompatible | |
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Internacional
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No |
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Nombre congreso
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XV congreso de la Sociedad Española de Fitopatología |
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Tipo de participación
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960 |
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Lugar del congreso
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Vitoria |
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Revisores
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Si |
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ISBN o ISSN
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978-84-457-3083-6 |
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DOI
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Fecha inicio congreso
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27/09/2010 |
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Fecha fin congreso
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01/10/2010 |
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Título de las actas
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Análisis Bioinformático y Funcional de efectores del sistema de secreción tipo III en Pseudomonas savastanoi pv savastanoi NCPPB 3335 |